乙肝DNA檢測有啥用？數值多少才是正常的？一文說(shuō)清楚
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01.
雙抗簡(jiǎn)介
據2021年全球暢銷(xiāo)藥物排行榜公布，2021年全球暢銷(xiāo)藥前10的藥品品種中，有4款是抗體藥物，而前20位中，有9款是單抗藥物，借助于單抗藥物良好的市場(chǎng)表現，抗體偶聯(lián)藥物，雙特異性抗體等抗體類(lèi)型逐漸成為企業(yè)研發(fā)的重點(diǎn)目標。
單克隆抗體主要結構是兩條對稱(chēng)的輕鏈和重鏈組成，雙特異性抗體通常是人工合成的，同時(shí)具有兩種特異性抗原結合位點(diǎn)的抗體，可通過(guò)靶向與傳統單克隆抗體比較，具有靶向性更強、毒性較低但研發(fā)生產(chǎn)技術(shù)壁壘高的特點(diǎn)。雙特異性抗體通常根據有無(wú)FC片段分為IgG類(lèi)雙抗（含FC片段）和非IgG類(lèi)雙抗（無(wú)FC片段），IgG類(lèi)雙抗根據是否對稱(chēng)又進(jìn)一步分為對稱(chēng)性IgG類(lèi)雙抗和不對稱(chēng)性IgG類(lèi)雙抗。
IgG類(lèi)雙抗含有FC片段，結構上與天然抗體較接近，抗原性較低。FC片段能與循環(huán)血液中FcRn受體結合避免被溶體酶水解而具有較長(cháng)半衰期，同時(shí)Fc片段介導的抗體依賴(lài)性細胞介導的細胞毒性作用（ADCC），補體依賴(lài)性細胞毒性作用（CDC）和抗體依賴(lài)細胞介導的細胞吞噬作用（ADCP）效應。由于Fc段含有A/G蛋白，可利用親和層析方式進(jìn)行抗體純化。但IgG類(lèi)雙抗也有腫瘤的滲透率較低，輕重鏈錯配率較高的缺點(diǎn)。非IgG類(lèi)雙抗結構簡(jiǎn)單，制備工藝簡(jiǎn)單，分子量小而具有較高的腫瘤滲透率，但也有半衰期短及無(wú)Fc片段介導效應的缺點(diǎn)。
表1：IgG類(lèi)雙抗和非IgG類(lèi)雙抗比較
02.
代表性雙抗技術(shù)平臺
由于雙抗是由兩個(gè)不同的輕鏈和重鏈通過(guò)組合的方式形成，因此就有16種組合方式。而這種隨機組合形成的抗體中只有12.5%的抗體能滿(mǎn)足結合雙特異性抗原位點(diǎn)的需求，難以從中分離出所需的目標抗體，被稱(chēng)為輕重鏈錯配。輕重鏈錯配會(huì )導致蛋白雜質(zhì)多，雙抗產(chǎn)量較低。針對輕重鏈錯配問(wèn)題，雙特異性抗體研發(fā)企業(yè)紛紛針對IgG類(lèi)雙抗和非IgG類(lèi)雙抗出臺技術(shù)平臺。
（一） IgG類(lèi)雙抗技術(shù)平臺
針對IgG類(lèi)雙抗更易出現輕重鏈錯配問(wèn)題，平臺主要解決此類(lèi)問(wèn)題。
1. KIH和Cross Mab技術(shù)平臺
KIH技術(shù)最早提出解決重鏈錯配問(wèn)題的方法，通過(guò)分別改變兩個(gè)重鏈結構上的氨基酸，使其中一條鏈上的大氨基酸突變成小氨基酸，相對應的另一條鏈上的小氨基酸突變成大氨基酸，突變后的位點(diǎn)分別形成凸、凹結構，從而通過(guò)靜電導向配對形成異源二聚體。此方法可防止90%以上的重鏈錯配問(wèn)題，但不能防止輕鏈錯配。而后羅氏在該平臺基礎上改進(jìn)形成的Cross Mab技術(shù)，簡(jiǎn)而言之即將兩個(gè)抗體的FC部分通過(guò)KIH技術(shù)形成異源二聚體，同時(shí)將其中一個(gè)抗體的Fab段輕重鏈進(jìn)行交換，形成正確的輕鏈結合。
2. DuoBody技術(shù)平臺
通過(guò)兩個(gè)靶向不同表位的單抗Fab臂互換反應得到雙特異性抗體。Fab臂互換反應是二硫鍵異構化反應和CH3域解離-締合的結果，其中在親代抗體鉸鏈區的重鏈二硫鍵被還原，所得游離的半胱氨酸與另一個(gè)親代抗體分子的半胱氨酸殘基形成重鏈間二硫鍵，同時(shí)親代抗體的CH3域通過(guò)解離-締合釋放和再形成。楊森研發(fā)的Amivantamab即利用此平臺技術(shù)，同時(shí)靶向C-MET和EGFR受體。
（二） 非IgG類(lèi)雙抗技術(shù)平臺
非IgG類(lèi)雙抗由于缺乏FC片段，無(wú)法與FcRn結合，從而普遍半衰期較短，各技術(shù)平臺主要通過(guò)延長(cháng)半衰期來(lái)促進(jìn)非IgG類(lèi)雙抗的臨床應用。
1. BITE技術(shù)平臺
此平臺是安進(jìn)公司用linker將兩個(gè)ScFV片段串聯(lián)起來(lái)，一個(gè)ScFV片段靶向T細胞CD3靶點(diǎn)，另一個(gè)ScFV片段靶向腫瘤細胞，串聯(lián)后的雙抗片段可同時(shí)結合腫瘤細胞并且和T細胞并且誘導T細胞殺滅腫瘤細胞。并且由于雙抗片段分子量較小，對腫瘤細胞滲透率大大提高，此技術(shù)擁有第一個(gè)上市的雙抗片段藥物—博納吐單抗，但半衰期只有2個(gè)小時(shí)。針對此缺點(diǎn)，安進(jìn)在此技術(shù)基礎上改良形成的HLE-BITE技術(shù)通過(guò)連接FC片段，可使半衰期顯著(zhù)延長(cháng)到44個(gè)小時(shí)以上。
2. TandAb技術(shù)平臺
由Affimed公司研發(fā)的由四個(gè)ScFv片段組成的兩條肽鏈抗體，肽鏈從N端到C端依次按VL1-VH2-VL2-VH1癿順序排列，兩條肽鏈形成同源二聚體連接，此技術(shù)合成的抗體分子量在100kd左右，相對于普通非IgG類(lèi)雙抗50kd的分子量可顯著(zhù)延長(cháng)半衰期。
03.
雙抗藥物研發(fā)情況
目前全球已有4個(gè)雙抗產(chǎn)品上市，首款上市藥品卡妥索單抗為T(mén)細胞重定向抗體，獲批適應癥為癌性腹水。但該藥上市后由于銷(xiāo)售額表現不佳，于2017年宣布退市。近期國內凌騰藥業(yè)已在全球范圍內重啟該藥物的上市流程，截至目前，已在中國啟動(dòng)了針對膀胱癌患者的I/II期臨床試驗，同時(shí)在韓國、臺灣等地的針對胃癌的Ⅲ期臨床試驗也已獲批。第二款上市雙抗藥品為安進(jìn)研發(fā)的非IgG類(lèi)藥物博納吐單抗，獲批適應癥是B細胞性白血病。博納吐單抗2020年銷(xiāo)售額3.79億元，同比增長(cháng)21.47%，影響其銷(xiāo)售額的主要原因是半衰期只有2個(gè)小時(shí)，降低患者用藥依從性。國內百濟神州已獲得該藥引進(jìn)授權，納入CDE優(yōu)先審評。第三款上市雙抗為羅氏研發(fā)的艾美賽珠單抗，艾美賽珠單抗是一款治療A型血友病抗體，IX和X因子都有結合位點(diǎn)，通過(guò)模擬FVIII的作用，橋連FIX和FX，促進(jìn)FXa的產(chǎn)生，該藥物的上市打破了血友病只能依靠Ⅷ因子的替代療法。艾美賽珠單抗2020年全球銷(xiāo)售額達到23.35億美元，于2018年11月通過(guò)優(yōu)先審評在國內上市，獲批適應癥用于存在凝血因子VIII抑制物的A型血友?。ㄏ忍煨阅蜃覸III缺乏）成人和兒童患者的常規預防性治療。2020年8月，羅氏申請艾美賽珠單抗用于治療存在凝血因子VIII抑制物的A型血友病，獲CDE的優(yōu)先審評，該適應癥的獲批意味著(zhù)艾美賽珠單抗可治療所有類(lèi)型A型血友病，前景較好。第四款藥物為強生的Amivantamab批準用于EGFR外顯子20插入突變陽(yáng)性的非小細胞肺癌患者治療，這是對此類(lèi)型的基因突變型肺癌的首款精準療法。
國內企業(yè)對雙特異性抗體的研究進(jìn)展迅速。據不完全統計，進(jìn)入臨床試驗階段藥物有65種，其中三分之二適應癥為腫瘤治療。除此之外，在免疫、血液、眼科等領(lǐng)域已有雙抗產(chǎn)品布局。雙特異性抗體靶點(diǎn)主要以下面幾種組合方式為主：1、同時(shí)靶向兩個(gè)腫瘤細胞信號通路蛋白發(fā)揮協(xié)同治療作用，岸邁生物研發(fā)的針對EGFR和cMET雙特異性靶點(diǎn)的EMB01已進(jìn)入臨床試驗階段；2、橋連免疫細胞和腫瘤細胞信號通路蛋白（又稱(chēng)T細胞重定向），凌騰生物重啟上市的卡妥索單抗靶向CD3和EpCAM；3、雙重免疫調節作用，例如國內雙抗研發(fā)領(lǐng)先企業(yè)康方生物，康寧杰瑞等主要靶點(diǎn)為PD-1，PD-L1，CTLA-4等雙免疫檢查點(diǎn)作用；4、免疫檢查點(diǎn)靶點(diǎn)和腫瘤信號靶點(diǎn)互相配合。
表2：國內雙抗研發(fā)代表企業(yè)及藥物
04.
雙抗產(chǎn)業(yè)鏈
由于目前國內暫無(wú)雙抗藥物上市，雙抗藥物的產(chǎn)業(yè)鏈集中在中上游環(huán)節。眾多企業(yè)通過(guò)研發(fā)外包服務(wù)降低研發(fā)成本，影響上游的主要因素為生物反應器的類(lèi)型以及培養條件，由于雙特異性抗體的細胞生長(cháng)過(guò)程中可能代謝水平發(fā)生改變，需要評估出有利于細胞新陳代謝的條件。同時(shí)由于雙特異性抗體易引起聚合體情況，故對抗體的純化提出更高要求，導致產(chǎn)量的降低。由于存在眾多的重鏈和輕鏈，分析方式上需要改進(jìn)，簡(jiǎn)單的凝膠分析已不滿(mǎn)足需求，需開(kāi)發(fā)出更靈敏的分析方法。
05.
小結
據預測，到2024年雙抗藥物的國內市場(chǎng)達到50億元規模。國內雙抗藥物研發(fā)靶點(diǎn)布局差異化，同質(zhì)化程度低，抗體研發(fā)著(zhù)力優(yōu)化生產(chǎn)工藝以及解決引起的細胞因子風(fēng)暴等不良反應。國內擁有知識產(chǎn)權且技術(shù)成熟的技術(shù)平臺較少，整體市場(chǎng)呈現良好的競爭格局。隨著(zhù)雙特異性抗體藥物臨床試驗的不斷推進(jìn)，國內臨床階段雙抗近期有望迎來(lái)上市突破。